Desenvolvimento e avaliação de novas formulações vacinais contra corynebacterium pseudotuberculosis

Abstract

Foi avaliado o desempenho de uma vacina de DNA e de subunidade contra a Linfadenite Caseosa como uma alternativa eficaz de controle e erradicação dessa enfermidade em rebanhos de ovinos e caprinos. O gene NPL/P60-Family secreted protein foi obtido a partir da imunovarredura de uma biblioteca de expressão de C. pseudotuberculosis. Esse gene expressa uma proteína secretada que, em bactérias do gênero Mycobacterium, está relacionada a fatores de virulência e invasão de células hospedeiras. O gene NPL/P60 foi amplificado pela PCR e clonado no plasmídeo pCDNA3.1+ para expressão gênica in vivo e pAE para expressão de proteína recombinante em E. coli. As construções foram confirmadas por sequenciamento, e a construção do plasmídeo NPL/ P60+pcDNA3.1+ será testada como imunógeno na vacina de DNA em grupos de camundongos BALB/c. Esses animais serão desafiados com a amostra virulenta 512 C. pseudotuberculosis ovis. As análises da resposta humoral dos camundongos imunizados com as vacinas serão realizadas a partir do soro sanguíneo coletado quinze dias após cada imunização e testado por meio da técnica de ensaio de absorção imunoenzimático (ELISA). Obtivemos como resultados parciais a expressão in vitro que foi realizada com o plasmídeo NPL/ P60+pAE para se obter uma proteína recombinante que, após ser purificada, será utilizada como vacina de subunidade. A avaliação da expressão in vivo para se obter a confirmação da mensagem vacinal foi realizada pela RTPCR obtida de RNA de camundongos BALB/c imunizados e transfectados em células de mamíferos, mas obtivemos baixa expressão; desta forma, planeja-se fazer uma nova extração de RNA. Espera-se com este projeto obter uma vacina segura, de fácil manipulação, que apresente eficácia imunológica e que, assim, seja capaz de proteger ovinos e caprinos.