Caracterização de antígenos de Neospora caninum para produção de insumos com valor diagnóstico, profilaxia e proteção na neosporose

Resumo

Neospora caninum é um protozoário intracelular obrigatório, do filo Apicomplexa, filogeneticamente relacionado ao Toxoplasma gondii. Relacionado a abortamento bovino desde a década de 90, tem despertado interesse crescente de pesquisadores do mundo todo. A julgar pelo fato que o Brasil possui o maior rebanho bovino comercial do mundo, considera-se que o impacto dessa parasitose sobre a cadeia de produção de carne e leite nacionais apresente importante magnitude. Vários tipos de vacinas contra N. caninum têm sido avaliadas, contudo a proteção conferida é parcial e dependente dos adjuvantes utilizados. O diagnóstico laboratorial da neosporose é classicamente realizado com o teste de imunofluorescência indireto, que apresenta limitações como a interpretação subjetiva do observador. Objetivando avaliar o perfil de reconhecimento antigênico em bovinos com infecção por N. caninum, amostras de soro foram avaliadas por Western blot (WB). Após o tratamento das amostras sorológicas com 6M de ureia a banda de 42 kDa passou a não ser reconhecida em soros de fase aguda, indicando ser um possível marcador de infecção recente da neosporose. Quando realizada análise com amostras de fase crônica da doença, houve o surgimento de proteínas de baixo peso molecular, variando entre 23-29 kDa, reconhecidas por anticorpos de alta avidez. Esses dados podem indicar que proteínas de baixo peso molecular possuam potencial para serem utilizadas na produção de insumos como marcadores de fase crônica da doença de neosporose. Para avaliar o perfil sorológico de reação cruzada entre N. caninum e T. gondii, o soro de animais infectados com ambos os parasitos foi submetido a WB contendo antígenos solúveis de N. caninum (NLA), a antígeno solúvel de T. gondii (STAg), a antígeno secretado/excretado de T. gondii (ESA) e a STAG sem a presença de antígeno secretado/excretado de T. gondii (STAg-ESA). Por ELISA, pode ser observado que soros de animais infectados com N. caninum não apresentaram reatividade cruzada com ESA (IE < 1,0), mas todos os animais apresentaram IE > 1,2 quando submetidos à reação com STAG-ESA. Por WB, as mesmas amostras de soro não reconheceram proteínas de baixo peso molecular de STAg, apresentando reatividade cruzada com bandas de 80, 53, 46 e 42 kDa. Ainda avaliando-se reatividade cruzada desses animais, foram constatadas reação cruzada com proteínas de 82 kDa de ESA e 82 e 75 kDa de STAG-ESA. Assim, o presente projeto apontou alvos proteicos para a confecção de ensaios específicos para o diagnóstico, bem como protocolos seguros e eficientes de vacinação contra a neosporose bovina.