Implicações para exatidão na quantificação do gossipol livre: II. Variabilidade associada à extração e efeito do tempo de maceração

Resumo

O gossipol é um alcalóide polifenólico tóxico presente em plantas do gênero Gossipium, como o algodoeiro (Gossipium hirsutum) e apresenta toxicidade na forma livre. Neste estudo, foi mensurada a contribuição da metodologia analítica para a variabilidade dos resultados, bem como o efeito do tempo de maceração em relação ao teor extraído. A metodologia proposta por Wang foi utilizada, com algumas modificações. Para a obtenção uma amostra com teor de gossipol homogêneo para as replicatas, 2,04 g de caroços descascados foram triturados em acetona (10 mL). A pasta obtida foi filtrada e as partículas foram passadas por peneiras de 1 mm e 0,25 mm. Foram realizadas seis replicatas com 1 e 0.25 mm de granulometria, às quais foram adicionados 10 mL de acetona e macerados por 16h, para obter a variabilidade analítica. O extrato foi filtrado em papel de filtro sob vácuo, seco e redissolvido em 10 mL de clorofórmio:ácido acético (99:1, v/v). A cromatografia foi realizada em coluna Zorbax C18 (250 x 4,6 mm, i.d. 5 μm), eluição gradiente (80:20; metanol- 0,1% ácido ortofosfórico:água, 70:30 v/v, e clorofórmio), com fluxo de 1,1 mL .minuto-1 e detecção a 254 nm (DAD). Para a avaliação da influência do tempo de maceração no teor de gossipol extraído, foi realizado o mesmo preparo destinado a obtenção de partículas de 0,25 mm. Foram analisados os tempos 1, 2, 4, 8 e 16h de maceração. A análise das replicatas não apresentou diferença no coeficiente de variabilidade entre as granulometrias (11,5 e 10,3%, 1 e 0,25 mm, respectivamente). Observou-se que as replicatas de menor tamanho apresentaram menor teor de gossipol extraído (650 μg g-1 ± 68 e 1.691,45 μg g-1 ± 159), provavelmente devido à extração por prensagem manual para o preparo da amostra em acetona, a exemplo do que ocorre durante a moagem convencional, na qual o gossipol liberado entra em contato com outras proteínas e pode se complexar e originar o gossipol ligado. Com relação ao efeito do tempo de maceração, considerando 16h de maceração como 100% de extração (3.896,05 μg g-1), observou-se que os tempos inferiores (1, 2, 4 e 8h) apresentaram 70 (2.715,7 μg g-1), 74 (2.887,7 μg g-1), 73 (2.864,8 μg g-1) e 72% (2.792,6 μg g-1) do teor de gossipol. Embora sejam inferiores ao tempo referência, os valores não diferem entre si num período de 1 a 8h. É possível que tempos a partir de uma hora sejam suficientes para a extração de uma quantidade de gossipol, provavelmente ligada à matriz mais superficialmente. Entretanto, ao longo de 16h, o teor restante, aderido fortemente a matriz, é extraído pelo maior tempo de contato com a acetona.