Frequência de subpopulações espermáticas no sêmen ovino criopreservado, identificadas por sondas fluorescentes

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Rodrigo Freitas Bittencourt
José Vasconcelos Lima de Oliveira
Marcos Chalhoub
Alessandro Bittencourt Nascimento
Mariana Santos Ribeiro de Barros
Antonio de Lisboa Ribeiro Filho

Resumo

Vinte amostras de semen criopreservadas, de dez carneiros Santa Ines, foram submetidas a avaliacao multiparametrica com associacao de sondas fluorescentes com o objetivo de verificar a frequencia de subpopulacoes espermaticas (SBP). Foi empregada a associacao das sondas iodeto de propidio (integridade de membrana plasmatica), aglutinina de Pisum sativum conjugada a fluoresceina de isotiocianato - FITC-PSA (integridade acrossomal) e JC-1 (potencial da membrana mitocondrial). Para tanto, uma amostra de 5μL de semen descongelado (2 X 106 espermatozoides) foi diluida em 120μL de meio X-CELL (IMV, L'Aigle, France), ao qual foram adicionadas as solucoes de trabalho das sondas fluorescentes nas seguintes proporcoes: 2μL de IP (25mg/mL) e 2μL de JC-1 (5mg/mL). A mistura foi homogeneizada, mantida protegida da luz e incubada a 37oC por 10 a 15 minutos. Apos esse periodo, foram adicionados 25μL da solucao de trabalho de FITC-PSA, procedendo-se novamente a homogeneizacao e logo em seguida uma aliquota dessa mistura de 10μL foi colocada entre lamina e laminula e 100 espermatozoides foram avaliados sob imersao, aumento de 1000x, em microscopia de epifluorescencia. Com esta tecnica foram identificadas e classificadas as celulas em oito subpopulacoes (SBP) espermaticas como descrito a seguir: SBP 1 - membrana plasmatica integra, acrossomo intacto e alto potencial de membrana mitocondrial; SBP 2 - membrana plasmatica integra, acrossomo intacto e baixo potencial de membrana mitocondrial; SBP 3 - membrana plasmatica integra, acrossomo lesado e alto potencial de membrana mitocondrial; SBP 4 - membrana plasmatica integra, acrossomo lesado e baixo potencial de membrana mitocondrial; SBP 5 - membrana plasmatica lesada, acrossomo intacto e alto potencial de membrana mitocondrial; SBP 6 - membrana plasmatica lesada, acrossomo intacto e baixo potencial de membrana mitocondrial; SBP 7 - membrana plasmatica lesada, acrossomo lesado e alto potencial de membrana mitocondrial; SBP 8 - membrana plasmatica lesada, acrossomo lesado e baixo potencial de membrana mitocondrial. As frequencias obtidas para as diferentes SBP foi de: SBP 1: 17,1%; SBP 2: 18,5%; SBP 3: 0,0%; SBP 4: 0,0%; SBP 5: 15,3%; SBP 6: 22,6%; SBP 7: 09,2% e SBP 8: 17,6%. As SBP 1, 2, 3 e 4 compoem os espermatozoides viaveis e a soma delas representou 35,6% do total, permitindo concluir que apos a criopreservacao apenas um pequeno percentual de celulas esta apta a realizar o processo de fertilizacao.

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Como Citar
BITTENCOURT, R. F.; OLIVEIRA, J. V. L. DE; CHALHOUB, M.; NASCIMENTO, A. B.; BARROS, M. S. R. DE; RIBEIRO FILHO, A. DE L. Frequência de subpopulações espermáticas no sêmen ovino criopreservado, identificadas por sondas fluorescentes. Revista de Educação Continuada em Medicina Veterinária e Zootecnia do CRMV-SP, v. 12, n. 3, p. 61-62, 6 mar. 2015.
Seção
RESUMOS CONBRAVET