Diagnóstico y caracterización molecular de virus rábico en muestras en avanzado estado de descomposición

Resumo

En Argentina existe una Red de Laboratorios Regionales de rabia que realizan el diagnóstico de rutina en animales a partir de muestras de cerebro mediante inmunofluorescencia directa (IFD) y aislamiento mediante ensayo biológico en ratones lactantes (EBRL). Las contramuestras de los positivos y/o los aislamientos de RABV se envían al Laboratorio Nacional de Referencia que es el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA) o al Instituto de Zoonosis Luis Pasteur (IZLP) perteneciente al Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires (GCABA), para identificar la especie reservorio usando un panel de anticuerpos monoclonales (caracterización antigénica). La toma, conservación y transporte adecuados de las muestras y/o aislamientos son factores decisivos para la correcta realización e interpretación de estos ensayos. Las elevadas temperaturas, como las que se registran en las provincias del norte de Argentina, pueden ocasionar el deterioro de los cadáveres de los animales investigados, provocando que las muestras de cerebro presenten desde una licuefacción leve hasta un avanzado estado de descomposición. Estas condiciones afectan la sensibilidad de las pruebas diagnósticas dado que provocan la degradación de la estructura viral y la producción de toxinas bacterianas. Asimismo, si los aislamientos de RABV no se conservan a muy bajas temperaturas (-70°C), pierden rápidamente su viabilidad lo que ha provocado la pérdida de muchas colecciones de RABV en laboratorios que carecen de la infraestructura adecuada. Se evaluó una técnica de RTPCR de un paso para el diagnóstico y caracterización molecular en muestras de tejido cerebral en avanzado estado de descomposición y en aislamientos antiguos. Se tomo un grupo de 10 cepas de rabia aisladas en cerebro de ratón lactante, de las variantes de mayor circulación en nuestro país, 3 cerebros caninos expuestos a descomposición controlada y 14 cepas antiguas. La caracterización antigénica se realizó mediante la técnica de inmunofluorescencia indirecta usando un panel de 19 anticuerpos monoclonales (CDC, USA). La caracterización molecular de una región de 159 nucleótidos correspondiente al gen de la nucleoproteína fue analizada y se confeccionó un árbol filogenético. La caracterización antigénica y molecular se correspondió en todos los aislamientos. En este estudio pudo efectuarse la caracterización molecular de los aislamientos de mayor circulación en Argentina, en muestras en avanzada descomposición y en cepas antiguas en forma directa, con una técnica que utiliza una pequeña porción del gen de la nucleoproteína viral en el 100% de las muestras.