Detecção de fungos em neoplasias e sua possível relação com a malignidade (projeto em andamento)

Abstract

Introdução: Os estudos com células neoplásicas demonstram que estas são fenotipicamente distintas entre si, apresentando diferentes características morfológicas, bioquímicas e fisiológicas, podendo ainda exibir características individualizadas quanto ao desenvolvimento e comportamento. A compreensão das interações entre as células e os diferentes compostos da matriz extracelular tornou-se essencial para a caracterização da complexidade do desenvolvimento neoplásico e das suas possíveis respostas aos diferentes tratamentos antineoplásicos disponíveis. Estudos anteriores demonstraram que pode haver desenvolvimento de fungos em amostras de tecido neoplásicos de diferentes órgãos isolados em excisões cirúrgicas. Fungemias são reconhecidamente recorrentes em pacientes oncológicos humanos imunossuprimidos. Muitos casos são negligenciados por acreditar-se que a imunossupressão é a causa da fungemia letal. Portanto, neste experimento pretende-se avaliar qualitativamente a presença de fungos em cortes histológicos de neoplasias mamárias de cadelas e analisar sua possível associação com o grau de malignidade.

Materiais e métodos: O experimento retrospectivo inicial visa analisar 100 amostras de neoplasias mamárias caninas por histopatologia e microscopia de fluorescência com a utilização de Hematoxilina/Eosina (HE), Hidróxido de Potássio (KOH) a 10% com Calcofluor White e possivelmente outras colorações para detecção direta de fungos que serão realizadas em cortes seriados.

Resultados Preliminares: Foi padronizada a colorização Calcofluor White para detecção de fungos em cortes histológicos conservados em parafina e também para aplicação em cultivos celulares. A melhor diluição obtida de KOH 10% e Calcofluor White foi de 2:1, respectivamente. Cortes histológicos foram desparafinizados e, após a passagem pelo álcool 70% e uma breve secagem, 150μl de KOH 10% foram adicionados, cobrindo o corte. Após um minuto, 75μl de Calcofluor White foram colocados sobre o KOH 10%, permanecendo por mais um minuto. O esgotamento da lâmina não deve ser realizado usando papel. Cobriu-se com lamínula e observou-se ao microscópio U.V. Foram realizadas fotomicrografias. O experimento piloto contou também com ensaios em células de cultivo, nos quais a quantidade de KOH 10% em cada poço foi 100μl e de Calcofluor White, 50μl. O processo foi realizado na própria placa de cultivo. Após o tempo indicado, retirou-se a lamínula com cuidado e essa foi colocada com a face invertida na lâmina para observação e registro. Iniciaremos a seguir a coloração e análise das primeiras 25 amostras de neoplasias mamárias caninas. Devido à difícil detecção direta de fungos em tecidos, é possível que o segmento desse experimento seja o cultivo.