Avaliação da expressão gênica de fatores de transcrição associados à transição epitélio-mesenquimal em cultivo de células-tronco cancerosas oriundas de neoplasias mamárias de cadelas (projeto em andamento)

Abstract

Introdução e objetivos: assim como em mulheres, as neoplasias mamárias representam o tipo mais frequente de câncer em cadelas. Esse tipo de neoplasia apresenta grande heterogeneidade celular o que torna complexa a sua classificação histopatológica, além de possivelmente ser o fator responsável pela grande diversidade de resposta aos tratamentos de eleição como exérese e quimioterapia. Recentemente tem sido estudado um grupo de células denominadas células-tronco cancerosas (CTCs), descritas como as principais responsáveis pelas falhas nas quimioterapias, formação de metástases e no aparecimento de recidivas tumorais, o que as torna um importante alvo para terapias específicas. Entretanto, alguns problemas são o seu isolamento e cultivo. Alguns estudos recentes realizaram indução do processo de transição epitélio-mesenquimal com a superexpressão de alguns fatores de transcrição como, Twist, Snail e ZEB, promovendo linhagens com capacidade de manutenção de características de CTCs. O presente trabalho foi delineado para a avaliação da expressão gênica dos fatores de transcrição associados à transição epitélio-mesenquimal em diferentes cultivos de células oriundas de neoplasias mamárias de cadelas, para futuramente ser utilizada a sua superexpressão como potencial indutor deste processo em cultivos celulares.

Material e métodos: quatro linhagens celulares foram caracterizadas quanto sua malignidade segundo o tempo de duplicação, cariótipo e expressão de marcadores como citoqueratina e vimentina. As células foram cultivadas em meio DMEM, suplementado com 1% MEGS, 0,5% de SFB e 1% de antibiótico. Ao ser atingido 80% de confluência tiveram seu RNA total extraído pelo reagente Trizol (Life Technologies). A quantidade e a qualidade do RNA total foram avaliadas (BioAnalyzer Agilent). A conversão de mRNA para cDNA foi realizada com o Kit SuperScript III Reverse Transcriptase (Life Technologies) que será utilizado para análise de expressão gênica por Real-Time PCR dos fatores de transcrição (FT) ZEB1, ZEB2, STAT3 e Slug. O FT que apresentar menor expressão nas quatro linhagens será escolhido para a técnica de transgenia para sua superexpressão.

Resultados: Quatro linhagens celulares oriundas de neoplasias mamárias (020/14; 025/14, 028/14 e 030/14) já foram isoladas e caracterizadas em testes de cariótipo, tempo de duplicação e expressão de marcadores citoqueratina e vimentina. Além disso, já foi realizada a padronização da técnica de expressão gênica para os genes ZEB1 e ZEB2.

Conclusão: Pela padronização dos primers, pode-se sugerir a existência de baixa expressão dos genes ZEB1 e ZEB2 nas quatro linhagens estudadas. Porém, ainda é necessária a realização de estudos de análise de expressão gênica para confirmação dos dados.