Padronização da técnica de mensuração imunoistoquímica de interleucina-31 cutânea em cães

Abstract

Cães com Dermatite Atópica (DA) apresentam o prurido como sinal clínico mais significativo, causando um efeito negativo na qualidade de vida do animal. Os mecanismos que causam o prurido ainda não foram totalmente elucidados, o que dificulta o desenvolvimento de novas terapias. Dentre os mecanismos imunológicos envolvidos, acredita-se que a interleucina 31 (IL-31) apresente papel fundamental. A IL-31 é uma citocina envolvida em doenças cutâneas, dentre elas a DA. A expressão da IL-31 é considerada maior em lesões pruriginosas em comparação às não pruriginosas. O presente trabalho padronizou a técnica de imunoistoquímica (IHQ) da interleucina 31 na pele de cães saudáveis, já que o anticorpo comercializado no Brasil ainda não possui padronização, para uma posterior mensuração de tal técnica na pele de cães atópicos. Foram coletadas 23 amostras de pele de cães saudáveis, previamente atendidos no HV da FMVZ-UNESP - Botucatu. As amostras foram obtidas por técnica de punch de duas regiões distintas (axilar e cervical dorsal), identificadas, imersas em meio de inclusão de espécies em congelação e conservadas em freezer a -80ºC. Os cortes histológicos foram realizados em criostato e dispostos em lâminas carregadas positivamente. As lâminas foram examinadas por microscopia óptica com a coloração de Hematoxilina e Eosina, e quando houve quantidade suficiente de epiderme para avaliação dos queratinócitos, pela técnica de IHQ, o material foi incluído no experimento. Para a técnica de IHQ foi utilizada a técnica padronizada no Laboratório de IHQ da Patologia Veterinária da FMVZ-UNESP, com algumas modificações e o anticorpo anti-IL31, diluído na proporção 1:100. O primeiro teste revelou marcação positiva em células inflamatórias da epiderme, estromais e alguns folículos pilosos. Parte da marcação foi considerada inespecífica e o protocolo foi adaptado para a minimização deste efeito. O novo protocolo apresentou resultados positivos, com marcações adequadas de IL-31. A técnica mostrou-se adequada para mensuração da proteína, possibilitando continuidade nos estudos para a avaliação de possíveis terapias para doenças de pele pruriginosas com envolvimento da IL-31.