Caracterização de uma nova mutação com perda de função do gene KMT2D em camundongos

Abstract

O camundongo mutante recessivo bate-palmas (bapa) originou-se de mutagênese química induzida por ENU e apresenta alterações posturais com movimentos anormais dos membros posteriores quando levantado pela cauda. No sequenciamento do exoma identificou-se uma mutação no gene KMT2D, localizado no cromossomo 15, que foi confirmada pelo método de Sanger. A perda da função do gene KMT2D em humanos foi descrita como responsável pela síndrome de Kabuki, uma anomalia congênita rara, autossômica dominante. O fenótipo clínico da doença é variável, mas algumas características mais comuns são face dismórfica, anormalidades esqueléticas, leve a moderado retardo mental e retardo do crescimento pós-natal. O presente trabalho analisa o comportamento e a morfologia crânio-facial dos camundongos bapa e compara as observações efetuadas com modelos de mutação do gene KMT2 descritos na literatura. As imagens radiográficas do crânio foram obtidas com o aparelho MinX-Ray e placa modelo Mark IIG, da marca Sound Eklin, utilizando 60 kV e 0,9, mas incidindo perpendicularmente ao plano filme-foco com distância de 65cm. As tomadas radiográficas foram projetadas lateralmente. A partir dessas radiografias definiram-se quatro regiões (numeradas de 1 a 4) para as medições, utilizando o programa Imagem J. Nos testes comportamentais foram avaliados os parâmetros: 1) atividade geral em campo aberto, incluindo tempo de locomoção e frequência de levantar, e 2) coordenação motora na trave elevada. Diferentemente do modelo transgênico Kmt2d+/βGeo, a análise das radiografias revelou que os camundongos bapa não apresentaram alterações na morfologia craniofacial. Na análise em campo aberto, os mutantes bapa apresentaram atividade geral similar aos controles e aumento da frequência de levantar. No teste da trave elevada, os camundongos bapa fizeram a travessia em maior tempo, quando comparados com o grupo controle, indicando discreto prejuízo motor. Visando possibilitar um modelo para estudar a síndrome de Kabuki, a partir desses resultados iniciais, que indicaram prejuízo motor, serão selecionados testes com maior especificidade, os quais auxiliarão na caracterização do fenótipo da mutação. Projeto aprovado pela CEUA FMVZ protocolo n. 1004070715. Apoio Financeiro: FAPESP processo 2016/23659-6