Mutação do gene TAF15 induzida por ENU (n-ethyl-n-nitrosourea) causando alterações psicomotoras e sensoriais no camundongo cruza pernas

Abstract

O camundongo mutante recessivo cruza pernas (crup), assim denominado devido à posição dos membros posteriores quando suspenso pela cauda, originou-se de mutagênese química por ENU. A mutação foi mapeada no cromossomo 11 e o sequenciamento do exoma resultou nos genes candidatos Slfn1, Slfn9, Taf15 e Heatr6, confirmados pelo método de Sanger. Este trabalho analisou a função desses genes, almejando sua validação como responsáveis pelo fenótipo observado, e investigou o comportamento dos camundongos crup visando relacionar as alterações fenotípicas com a mutação. A escolha dos genes candidatos foi realizada com base na consulta a bancos de dados virtuais e pesquisa na literatura. A caracterização fenotípica foi efetuada com camundongos crup com 4, 14 e 24 semanas de idade e seus controles BALB/c. Os testes comportamentais empregados foram: atividade geral em campo aberto, incluindo parâmetros psicomotores, sensoriais e ligados aos sistemas Nervoso Central (SNC) e Autônomo (SNA), e postura no teste de suspensão pela cauda. O gene Taf15 foi identificado como forte candidato por atuar principalmente sobre neurônios motores no SNC. Polimorfismo nesse gene poderia levar às alterações observadas no crup, como a falta de coordenação motora dos membros posteriores. Em humanos, a mutação nesse mesmo gene pode acarretar esclerose lateral amiotrófica, cujas características, entre outras, são perda motora e agravamento do fenótipo com o envelhecimento do indivíduo. No teste do campo aberto, foram constatadas diferenças estatísticas (p<0,05) nos resultados dos escores do trem posterior (p=0,0004), aperto de cauda (p=0,0350), micção (p=0,0034), defecação (p=0,0047), força de agarrar (p=0,0004), e grooming (p=0,0185). Três parâmetros são ligados ao sistema psicomotor (trem posterior, força de agarrar e grooming) e demonstram a perda motora nos mutantes. A perda sensorial relacionada à dor no aperto de cauda foi confirmada. No teste de suspensão pela cauda houve diferença significante na postura (p=0,0001), demonstrando alterações psicomotoras. As alterações observadas nos mutantes crup foram progressivas e se agravaram com a idade. O gene Taf15 apresenta importante mecanismo sobre o controle motor, portanto, a mutação deste gene pode resultar nas alterações fenotípicas observadas nos mutantes crup. Projeto aprovado pela CEUA FMVZ protocolo nº 3773120116. Apoio financeiro: PIBIC-CNPq – Processo nº 144532/2016-6