Produção de IFN-γ (interferon gama) pelas células mononucleares do sangue de bezerros recém-nascidos estimulados com o vírus da diarreia viral bovina (VDVB)

Abstract

O desenvolvimento dos órgãos linfóides primários e secundários de fetos da espécie bovina se completa com 175 dias de gestação, no entanto, seu crescimento ocorre em ambiente uterino estéril e impermeável, que dificulta o amadurecimento da sua resposta imune específica, que é dependente da exposição aos patógenos. Acredita-se que os altos níveis de progesterona, prostaglandina E2, IL-4 e IL-10 produzidas pela placenta bovina promovem resposta imune no bezerro pré-termo predominantemente do tipo TH2, envolvidas com a ativação de linhagens de células B e produção de anticorpos, direcionadas à defesa contra microorganismos extracelulares. Desta forma, a resposta celular do tipo TH1, responsável pela imunidade específica para agentes virais estaria suprimida. Assim, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a resposta imune TH1 pela mensuração de IFN-γ interferon gama produzidos pelas células mononucleares do sangue de bezerros recém-nascidos estimulados com o VDVB estirpe NADL. Foram selecionados 03 bezerros recém-nascidos, que receberam 6L de colostro, provenientes de mães vacinadas com vacina comercial contendo as estirpes 5960 e 53637 do VDVB. Foram colhidas amostras de sangue dos bezerros (40mL) em tubos contendo heparina, nos seguintes momentos: 15 dias (T0) e 40 dias (T1) após o nascimento. Realizouse a separação das células mononucleares por gradiente de densidade usando Ficoll-paque 1.077 (GE®). As células foram lavadas duas vezes em solução salina tamponada (PBS) por meio de centrifugação refrigerada. Em seguida, o "pellet" celular foi ressuspenso em 1mL de meio de cultivo celular RPMI suplementado. A concentração celular foi obtida pelo teste de exclusão do azul de Trypan e ajustada para 5x10⁶/mL. Foram distribuídos 200 microlitros da suspensão celular (1x106 células) em placas de cultivo celular na ausência e presença do vírus, usando as seguintes doses virais: TCID50 10-5/mL; TCID50 10-6/mL, TCID50 10-7/mL, TCID50 10-8/mL. As placas foram cultivadas por quatro dias a 37°C em estufa de CO2. Após a incubação, o conteúdo das placas foi aspirado para a determinação da produção de IFN-γ por meio de imunoenzimático qualitativo (Bovine IFN- γ EASIA, Invitrogen®). Foi possível verificar a produção de IFN-γ na ausência e presença do estímulo viral em 2/3 bezerros, usando as doses TCID50 10-5/mL; TCID50 10-6/mL, TCID50 10-8/ mL. No entanto, apenas 1/3 dos animais responderam a dose TCID50 10-7/mL. Desta forma pode- se concluir que os leucócitos mononucleares ao sangue de bezerros recém-nascidos são capazes de produzir citocina IFN- γ, mesmo na ausência da estimulação viral.