Análise da resposta inflamatória frente a estirpes neurotrópicas do herpesvírus equino tipo 1 em camundongos isogênicos nos segundo e terceiro dia após infecção por meio do método de citometria de fluxo

Abstract

Introdução e objetivos: o herpesvírus equino tipo 1 (EHV-1), importante patógeno para os equinos pode provocar quadros de rinopneumonite, abortamento, mortalidade perinatal e mieloencefalopatia herpética equina (EHM). Para o estudo desse vírus, devido às similaridades encontradas com a infecção e a resposta imune no cavalo, o camundongo tem sido utilizado como modelo biológico. No presente trabalho foi efetuada a quantificação das concentrações das citocinas pró-inflamatórias IL-6, IL-10, IFN-γ, TNF-α, IL- 12p70, e da quimiocina CCL2 (MCP-1) em camundongos isogênicos inoculados por via intranasal com as estires brasileiras A4/72 e A9/92 do EHV-1.

Material e Métodos: fêmeas de camundongos BALB/c, C57BL/6 e C3H/HeJ com oito semanas de idade foram inoculadas pela via intranasal com as estirpes A4/72 e A9/92 do EHV-1. Os camundongos dos grupos controle receberam apenas meio essencial de Eagle pela via intranasal. A coleta do sangue foi efetuada nos 2º e 3º dpi. As concentrações plasmáticas de IL-6, IL-10, IFN-γ, TNF-α, IL-12p70 e CCL2 foram mensuradas com o Cytometric Bead Array Mouse Inflammation Kit. Os resultados foram analisados com o programa estatístico Graph Pad InStat (versão 3.01, 32 bit for Windows 95/NT).

Resultados e discussão: no 2º dpi todas as linhagens de camundongos apresentaram aumento significativo (p<0,05) de IL-6, IFN-γ e TNF-α e CCL2 quando infectados com a estirpe A4/72 do EHV-1. A exceção foi a linhagem C57BL/6 que não apresentou aumento apenas de CCL2. Já os animais inoculados com A9/92 apresentaram aumento apenas de IFN-γ e CCL2. Já no 3º dpi todas as linhagens de camundongos apresentaram aumento de IL-6, TNF-α e CCL2 quando inoculados com A4/72. A exceção foi a linhagem C3H/HeJ que não apresentou aumento significativo de TNF-α. Observou-se ainda que todas as linhagens inoculadas com A4/72 apresentaram elevações nos valores de TNF-α superiores aos observados nas infectadas com A9/92. Esse achado ressalta a variação das características intrínsecas das estirpes virais. De um modo geral, a comparação da concentração das citocinas pró-inflamatórias do 2º dpi para o 3º dpi apresentou aumento significativo de IL-6 e diminuição de IFN-γ, TNF-α e CCL2, havendo pouca ou nenhuma diferença entre as três linhagens isogênicas estudadas.

Conclusão: Os achados do presente estudo indicaram que o desafio viral com as estirpes neurotrópicas do EHV-1 em camundongos induziu a produção de IFN-γ que estimulou a produção de TNF-α, IL-6 e CCL2. A diminuição da concentração de IFN-γ, TNF-α e CCL2 do 2º dpi para o 3º dpi sugere que este fato pode estar relacionado a um mecanismo de escape do EHV-1 ou à sua capacidade de modificar a resposta imune do hospedeiro. Portanto, eles devem desempenhar um papel importante na fisiopatogenia da EHM.